「被験物質を哺乳動物に繰り返し投与したとき、明らかな毒性変化を惹起する容量とその変化の内容、および毒性変化の認められない容量を求めること」

動物種

2種類以上（両性を利用）
１種類はげっ歯類、1種類はウサギ以外の非げっ歯類

マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ハムスター、イヌ、サル が使われることが多い

投与方法

経口（強制、混餌）、静脈内（ボーラス、インフュージョンポンプを用いた長時間持続注入）、腹腔内、皮下、皮内、筋肉内、点眼、経皮（塗布、貼付）、直腸内、関節腔内、口腔粘膜など 

動物数

一群当りげっ歯類はオスメス各10頭以上、非げっ歯類はオスメス各3頭以上とのみ規定されており、最終段階で評価に耐える動物数を確保するとされている
さらに、中間屠殺や回復性試験をする場合は必要な数を追加する

例：カニクイザルの3ヶ月反復毒性試験（H19）では、オスメス18頭計36頭で試験をしている

※動物数の上限は決まっていないが最低限の数は決まっている。

• げっ歯類はオスメス各10頭以上、げっ歯類以外ではオスメス各3頭以上
• 投与量を3群以上にわけて行うため、最低でもげっ歯類の場合は60頭、げっ歯類意外だと18頭以上ということになる

※　亜急性毒性試験（１～３ヶ月）と慢性毒性試験（６～１２ヶ月）をあわせて、反復投与試験という 

検査項目

1. 一般症状の観察　※動画参照
2. 体重
3. 摂餌量
4. 摂水量
5. 血液検査
6. 尿検査
7. 眼科学検査
8. 倍検および病理学的検査
   ※最終的にはほとんどの場合が殺す
9. 回復性を見ることもある
10.